Запрошуємо до співпраці виконавців курсових та дипломних робіт на взаємовигідних умовах.

Культуры клеток и их условия выращивания (вирусология)

культури забезпечує високий вихід кліток.

Первинні культури можуть бути також отримані від шматочків тканини, об'ємом 1 мм, які прикріпляються до поверхні субстрата завдяки власній адгезивності або наявності насічок на чашці, або за допомогою згустка плазми. У цих випадках відбуватиметься зростання кліток з фрагментів. Клітки, мігруючі з експлантатів можуть використовуватися для пасивування. Фрагменти тканини (експлантати) переносяться на нові чашки, мігруючі клітки можуть віддалятися пересіванням, сумішшю Версену і трипсину, а експлантати, що залишаються, утворюватимуть нові вирости.

Відомі такі первинні культури, як культура фібробластів курячого ембріона, культура кліток нирки теляти, лейкоцити.

 

ОТРИМАННЯ МОНОСЛОЙНИХ КУЛЬТУР КЛІТОК, ЩО ПЕРЕВИВАЮТЬСЯ.

 Як вже наголошувалося вище, одним з методів отримання клітинних ліній, що перевиваються, є відбір кліток з підвищеною активністю зростання і розмноження з популяції первинних культур. Відбір можна здійснити при регулярній зміні середовища, що омиває моношар первинно трипсинизованної клітинної культури. Для цього відбирають матраци з добре сформованим клітинним моношаром (самі матраци повинні мати рівне дно і не повинні мати на стінках подряпин і матових плям). Приготоване для систематичної зміни ростове середовище розливають по невеликих судинах (щоб виключити бактерійне забруднення) і зберігають при t - 4°.

Зміну середовища проводять регулярно, не рідше за 1 раз на тиждень. Протягом перших 3 тижнів замінюють по 20 - 30% об'єму ростового середовища, протягом наступних 3 - 4 тижнів - 50 - 60%, пізніше проводять повну зміну середовища. Свіже середовище безпосередньо перед роботою підігрівають до t - 37°.

У міру зміни середовищ клітки міняють свою морфологію

Частина кліток округляється і відпадає від скла. Більшість кліток стягуються до центру, і моношару набуває зірчастий вигляд. Самі клітки при цьому декілька подовжуються. Через 7 - 10 змін середовища в матрацах, як правило, починають з'являтися нові клітинні елементи, причому в різних культурах вони мають різну морфологію.

У культурі кліток нирки курячого ембріона в центрі моношару або між стягнутими його ділянками з'являються закруглені клітинні елементи, з яких поступово формуються скупчення у вигляді невеликих колоній. У культурі кліток нирки мавпи з'являються одиночні утворення, що нагадують зерна. Клітки щільно прилягають один до одного, утворюючи дрібні прозорі колонії. Кількість таких кліток наростає поволі, розміри колоній також майже не збільшуються. Колонії з'являються не тільки на дні матраца, але також на бічних поверхнях, на межі живильного середовища. Тому обов'язковою умовою при зміні живильного середовища є підтримка її постійного об'єму. У культурі кліток нирок ембріона людини на тлі масової дегенерації стягнутого в тяжи моношару виявляються крупні полігональні клітки з довгими відростками.

Виниклі в процесі відбору атипові клітинні елементи повинні бути відокремлені від решти ділянок моношару і перенесені в окремі пробірки або матраци. Для цього може бути використаний метод версенізації або механічний відкол атипових кліток за допомогою бактеріологічної петлі або шпателя. Останній спосіб особливо необхідний при роботі з культурою кліток нирок мавпи, де колонії атипових кліток щільно прикріплені до скла і самі від нього не відділяються.

При зміні живильного середовища у разі появи атипових кліток рекомендується обережно видалити велику частину ростового середовища, а меншою частиною

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Похожие работы

Рефераты

Курсовые

Дипломные