Культуры клеток и их условия выращивания (вирусология)

енергійно відполіскувати моношар і це середовище розлити по пробірках. В цьому випадку в середовищі можуть опинитися атипові клітки, що володіють здатністю утворювати колонії, придатні для подальших пересівань.

Після перенесення культури атипових кліток в новий посуд спостереження за основною культурою доцільно продовжити, оскільки процес виведення нової клітинної лінії вельми складний, і далеко не завжди відібрані атипові елементи дають початок життєздатної лінії кліток, що перевиваються. Необхідно, щоб вся робота по отриманню нових клітинних ліній, що продовжується протягом багатьох місяців, проводилася з одними і тими ж живильними середовищами, сироватками тварин і серіями антибіотиків.

Відомі такі первинні культури, як культура кліток нирки золотистого хом'яка (BHK), культура кліток нирки сибірського гірського козерога (ПСГК), культура кліток нирки зеленої мавпи (CV).

 

 РОЛЛЕРНЕ КУЛЬТИВУВАННЯ КЛІТОК

 До недавнього часу тканинні культури застосовувалися у вірусології переважно у вигляді одношарових стаціонарних культур. У багатьох випадках цей метод вирощування кліток є незамінним. Багаторічний досвід показує, що при використанні одношарових стаціонарних культур зустрічається ряд труднощів, пов'язаних з величезними витратами робочого часу і матеріалів. З цієї точки зору, вигідніші роллерні культури, які економічні, характеризуються оптимальним відношенням корисної площі культивування до об'єму живильного середовища і відкривають сприятливі можливості для накопичення клітинної маси.

Термін «роллерні культури» позначає метод культивування, при якому клітинний моношар розташовується по всій циліндровій поверхні судин, що горизонтально обертаються, і періодично омивається живильним середовищем. Через певні причини деяка кількість кліток може в окремих випадках бути зважене в культуральному середовищі. У подібному варіанті культуру кліток називають роллерно-суспензійною. "Врожайність" клітинної культури буде тим більше, чим більше площа, з якою збирають клітки. Дослідники використовували різні шляхи збільшення площі поверхні, на якій відбувалося прикріплення і розмноження кліток. Для цього застосовували різного характеру основи з великою питомою поверхнею: тверду, губчасту, з шерсті, колагену, на скляних спіралях і так далі Широкого поширення ці методи не набули, оскільки значно утрудняли маніпуляції з клітками, але слід зазначити описану Л. С

Ратнером і В. А. Крікуном методику багатоярусного культивування. Клітки культивували в 1,5, 10 і 15-літрових бутлях, повністю завантажених овальними скляними трубками, розташованими паралельно подовжній осі судин. Корисна площа при цьому зростала в порівнянні із стаціонарними одношаровими культурами в судинах того ж об'єму в 20 разів. Культивування проходило в 2 етапи. На першому етапі бутлі обертали навколо горизонтальної осі з метою рівномірного розподілу кліток. Надалі, коли клітки прикріплялися до скла, культивування продовжувалося в стаціонарному положенні. Описана культуральна система була успішно використана для культивування вірусу ящура.

Ефективнішим виявилося обертання судин, в яких відбувалося розмноження кліток. Спочатку клітки вирощували в пробірках, але з розвитком технічного оснащення зросли об'єми культуральних судин, і від вирощування кліток в пробірках, що обертаються, дослідники перейшли до бутлів, що оберталися. Роллерниє культури почали застосовуватися як для накопичення кліток, так і розмноження вірусів.

Для роллерного культивування використовуються спеціальні стелажно- ярусні апарати для обертання бутлів або барабани. Найчастіше для культивування використовують 0,5—3-літрові бутлі. У виробничих умовах об'єм їх може досягати 20 літрів і більш. Апарати для роллерного культивування прості, надійні і обслуговування їх нескладно. Велике значення має швидкість обертання

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Похожие работы

Рефераты

Курсовые

Дипломные