Запрошуємо до співпраці виконавців курсових та дипломних робіт на взаємовигідних умовах.

Культуры клеток и их условия выращивания (вирусология)

стадії, як правило, кількість кліток зменшується, в другій стадії популяція кліток збільшується (логарифмічна стадія зростання), в третій стадії збільшення кількості кліток не спостерігається (стаціонарна фаза). Якщо культивування продовжити далі, то виявиться період зменшення чисельності кліток-фаза логарифмічного відмирання (фаза руйнування). Швидкість розмноження кліток в логарифмічній фазі зростання виражають часом генерації. Під часом генерації мається на увазі період, необхідний для подвоєння популяції кліток в культурі. Для суспензійного вирощування кліток важливою умовою є перемішування рідини, яке повинне бути безперервним і достатньо інтенсивним, щоб підтримувати клітки в зваженому стані, перешкоджати їх осадженню і прикріпленню до стінок судини і в той же час не викликати їх механічного пошкодження.

Перемішування суспензійних культур проводять лопатевими магнітними мішалками, а також круговими гойдалками. В даний час широко застосовують обертання флаконів і бутлів навколо подовжньої осі (15-40 об/мин). На магнітних мішалках швидкість обертання складає 100—200 об/мин. Швидкість перемішування залежить від об'єму культури; малі об'єми культури вимагають невисокої швидкості, тоді як її необхідно збільшити при великих об'ємах. Для запобігання осіданню кліток на внутрішній поверхні судини проводять силіконіруання. Силіконове покриття через свою гідрофобності перешкоджає прикріпленню кліток до стінки судини.

Внутрішні стінки культуральної судини змочують 5% або 10%-ним розчином силікону і після випаровування розчинника (бензолового, ацетонового) судини витримують при 85°С і 200° (відповідно протягом 30 і 60 мін). Після охолоджування судини наповнюють гарячою бідистильованою водою і залишають на 2 години, потім їх 3 рази обполіскують бідистильованою водою і висушують при 100°С. Судини стерилізують в сушильній шафі при 170°С протягом 2 годин.

Максимальне зростання кліток в суспензії спостерігають при рН 7,0-7,2. Живильні середовища, вживані для вирощування кліток в суспензії, не відрізняються від середовищ, використовуваних для вирощування клітинних ліній в одношаровій культурі

Найчастіше при культивуванні кліток в суспензіях беруть середовище Голка з двократною концентрацією амінокислот і вітамінів.

Суспензійні культури споживають в 2-7 разів більше глюкози, чим монослойні. В процесі споживання глюкози клітки виділяють в середу токсичну для них молочну кислоту. Споживання клітками глюкози і виробітку молочної кислоти йдуть паралельно і знаходяться в прямій залежності від щільності клітинної популяції. Корисним виявилося збільшення до живильного середовища інсуліну в кількості від 40 до 200 ЕД на 1 л. Збільшення до живильного середовища інсуліну змінює співвідношення між кількістю поглиненої глюкози і виділеної молочної кислоти. Для кліток лінії L вказаний коефіцієнт може бути понижений з 74-81 до 37-38%.

Різні амінокислоти споживаються з живильного середовища клітками, що ростуть, з неоднаковою швидкістю. Відмічено, що регулярне збільшення аргініну (20-40 міліграм/л) і збільшення кількості глутаміну до 450 міліграма/л сприяють зростанню зважених культур.

Збільшення інозитолу (0,4 міліграм/л) дозволяє прискорити зростання культур амніотичних кліток людини. Бажаним є додавання до середовища каталази (1 міліграм/л) і тироксину (12 міліграм/л).

Великий інтерес представляють роботи, присвячені отриманню зважених культур кліток в синтетичному середовищі, що не містить сироватки крові. Робляться спроби збільшити в'язкість живильного середовища за рахунок безбілкових інгредієнтів. З цією метою використовується метил-целюлоза і гіалуронова кислота.

Метилцелюлоза в концентрації 0,1-0,2% володіє максимальною захисною дією на зважені в середовищі клітки. Протектівноє дія метилцелюлози полягає в тому, що

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Похожие работы

Рефераты

Курсовые

Дипломные