Запрошуємо до співпраці виконавців курсових та дипломних робіт на взаємовигідних умовах.

Культури клітин та їх умови вирощування (вірусологія)

молекули утворюють захисний шар навколо клітки, що запобігає пошкодженню кліток при перемішуванні середовища. Вельми важливим показником стану суспензійної культури є парціальний тиск кисню в рідкій фазі. Концентрація кисню в газовій фазі залежить від щільності клітинної популяції і нерідко буває нижче атмосферною. Недолік кисню веде до появи грануляції цитоплазми, клітки втрачають правильну округлу форму. При невеликому надлишку кисню клітки мають добре обкреслену, правильну, округлу форму, і стають дуже великими при ушкоджувальній дії надлишку кисню. Оптимальна концентрація кисню для різних клітинних культур знаходиться в межах від 9 до 17% або 293 мм рт. стовпа. При концентрації кисню вище 20% відбувається інгібіція клітинного зростання. Так, при концентрації кисню 24% розмноження кліток нирок ембріона кролика (лінія ERK) знижувалося наполовину, а при 30% зводилося до нуля. Підвищення концентрації кисню токсично впливає на клітинний метаболізм.

Таким чином, розмноження кліток в суспензії залежить від концентрації кліток в початковій суспензії, аерації і рН середовища, складу живильного середовища, способу перемішування, об'єму суспензії і інших чинників.

Однорідність суспензії, можливість тривалої підтримки кліток в логарифмічній фазі зростання, перспективи математичного моделювання процесів клітинного зростання залежно від впливу чинників зовнішнього середовища, зручність багатократного дослідження фізіологічного стану культури кліток в суспензії, висока економічність методу -вот далеко не повний перелік переваг суспензійних культур

Суспензійні культури широко використовується у вірусологічних дослідженнях і для накопичення великих кількостей вірусовмісного матеріалу, при виготовленні вакцин і діагностичних препаратів.

 

КУЛЬТИВУВАННЯ КЛІТОК НА МІКРОНОСІЯХ.

 У 1967 р. Van Werel запропонував метод культивування, що поєднує елементи монослойного і суспензійного вирощування кліток, який він назвав методом «мікроносіїв». Суть його полягає в тому, що клітки прикріпляються і розмножуються на поверхні полімерних кульок-частинок «мікроносіїв» (МН), які містяться в суспензії за допомогою перемішуючого пристрою, наприклад мішалки. На одній частинці МН діаметром 160—230 мм може поміститися 350-630 (або в середньому 460) кліток. У одному мл середовища можна суспензувати декілька тисяч частинок мікроносія, при цьому загальна площа їх складе від декількох до 50 см2/мл.

Інокульовані в культиватор клітки прикріпляються до поверхні частинок МН і розмножуючись, утворюють суцільний моношар на кожній окремій частинці.

Основними перевагами цього методу є:

1) створення рівномірних умов за всім обсягом судини, що робить можливим ефективно контролювати необхідні параметри (рН, р02 і ін. ); 2) отримання високої щільності клітинної популяції до 5-6 млн. кліток в 1 мл; 3) культивування одночасне декілька сотів мільярдів кліток; 4) введення постійного контролю за динамікою зростання кліток; 5) зниження зростання контамінації у зв'язку з скороченням операцій, пов'язаних з розгерметизацією культуральної судини; 6) значна економії живильних середовищ; 7) можливість зберігати клітки, що виросли, безпосередньо на частинках при низьких температурах; 8) можливість штучно створювати різні концентрації МН з клітками, що виросли на них; 9) можливість пасивування культури без застосування трипсину шляхом додавання свіжих порцій мікроносія.

Мікроносії повинні мати:

- невеликий позитивний заряд в межах 1,5-1,8 Мекв/г. У зв'язку з тим, що більшість кліток тварин мають слабо негативний заряд, вони легше прикріплятимуться до такого МН:

- щільність 1,05—1,15 г/см; вказана

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Схожі роботи

Реферати

Курсові

Дипломні