Пропонуємо роботу для виконавців курсових і дипломних робіт.

Культури клітин та їх умови вирощування (вірусологія)

молекули утворюють захисний шар навколо клітки, що запобігає пошкодженню кліток при перемішуванні середовища. Вельми важливим показником стану суспензійної культури є парціальний тиск кисню в рідкій фазі. Концентрація кисню в газовій фазі залежить від щільності клітинної популяції і нерідко буває нижче атмосферною. Недолік кисню веде до появи грануляції цитоплазми, клітки втрачають правильну округлу форму. При невеликому надлишку кисню клітки мають добре обкреслену, правильну, округлу форму, і стають дуже великими при ушкоджувальній дії надлишку кисню. Оптимальна концентрація кисню для різних клітинних культур знаходиться в межах від 9 до 17% або 293 мм рт. стовпа. При концентрації кисню вище 20% відбувається інгібіція клітинного зростання. Так, при концентрації кисню 24% розмноження кліток нирок ембріона кролика (лінія ERK) знижувалося наполовину, а при 30% зводилося до нуля. Підвищення концентрації кисню токсично впливає на клітинний метаболізм.

Таким чином, розмноження кліток в суспензії залежить від концентрації кліток в початковій суспензії, аерації і рН середовища, складу живильного середовища, способу перемішування, об'єму суспензії і інших чинників.

Однорідність суспензії, можливість тривалої підтримки кліток в логарифмічній фазі зростання, перспективи математичного моделювання процесів клітинного зростання залежно від впливу чинників зовнішнього середовища, зручність багатократного дослідження фізіологічного стану культури кліток в суспензії, висока економічність методу -вот далеко не повний перелік переваг суспензійних культур

Суспензійні культури широко використовується у вірусологічних дослідженнях і для накопичення великих кількостей вірусовмісного матеріалу, при виготовленні вакцин і діагностичних препаратів.

 

КУЛЬТИВУВАННЯ КЛІТОК НА МІКРОНОСІЯХ.

 У 1967 р. Van Werel запропонував метод культивування, що поєднує елементи монослойного і суспензійного вирощування кліток, який він назвав методом «мікроносіїв». Суть його полягає в тому, що клітки прикріпляються і розмножуються на поверхні полімерних кульок-частинок «мікроносіїв» (МН), які містяться в суспензії за допомогою перемішуючого пристрою, наприклад мішалки. На одній частинці МН діаметром 160—230 мм може поміститися 350-630 (або в середньому 460) кліток. У одному мл середовища можна суспензувати декілька тисяч частинок мікроносія, при цьому загальна площа їх складе від декількох до 50 см2/мл.

Інокульовані в культиватор клітки прикріпляються до поверхні частинок МН і розмножуючись, утворюють суцільний моношар на кожній окремій частинці.

Основними перевагами цього методу є:

1) створення рівномірних умов за всім обсягом судини, що робить можливим ефективно контролювати необхідні параметри (рН, р02 і ін. ); 2) отримання високої щільності клітинної популяції до 5-6 млн. кліток в 1 мл; 3) культивування одночасне декілька сотів мільярдів кліток; 4) введення постійного контролю за динамікою зростання кліток; 5) зниження зростання контамінації у зв'язку з скороченням операцій, пов'язаних з розгерметизацією культуральної судини; 6) значна економії живильних середовищ; 7) можливість зберігати клітки, що виросли, безпосередньо на частинках при низьких температурах; 8) можливість штучно створювати різні концентрації МН з клітками, що виросли на них; 9) можливість пасивування культури без застосування трипсину шляхом додавання свіжих порцій мікроносія.

Мікроносії повинні мати:

- невеликий позитивний заряд в межах 1,5-1,8 Мекв/г. У зв'язку з тим, що більшість кліток тварин мають слабо негативний заряд, вони легше прикріплятимуться до такого МН:

- щільність 1,05—1,15 г/см; вказана

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Схожі роботи

Реферати

Курсові

Дипломні