Культивування і збереження вірусів

Культивування і збереження вірусів

Віруси - неклітинні форми життя, автономні генетичні структури з особливим геном, облігатні внутрішньоклітинні паразити без білоксинтезуючої, ферментативної й енергетичної систем, здатні репродукуватися особливим – роз’єднаним (диз’юнктивним) способом в клітинах усіх видів організмів.

Культивування вірусів проводиться для їх виділення та накопичення з діагностичними цілями для подальшого їх вивчення і для приготування вакцин.

Застосовують три методи культивування:

1) у культурі клітин;

2) у курячому ембріоні;

3) в організмі чутливих тварин.

Клітинні культури - це штами нормальних тканин людини, тварин, тканин злоякісних пухлин. Їх ріст підтримується послідовними пасажами в живильних середовищах (199, Ігла та ін. ), що містять повний набір речовин, необхідних для росту клітин поза організмом

Типи культур клітин

1. Первинно-трипсинізовані – отримують із подрібнених тканин людини та тварин шляхом їх обробки трипсином чи іншими ферментами. Витримують лише 5-10 поділів (пасажів).

2. Перешеплювані – клітини, які набули здатності до безмежного розмноження, оскільки є похідними пухлин людини та тварин.

3. Напівперещеплювані (диплоїдні) – можуть витримувати до 100 пасажів, зберігаючи при цьому вихідний диплоїдний набір хромосом.

Прояви дії вірусів у культурі клітин

У заражених культурах клітин наявність вірусу можна виявити за цитопатичною дією (ЦПД), за утворенням внутрішньо-клітинних включень, бляшок, у реакціях гемадсорбції й гемаглютинації та за кольоровою пробою.

Курячі ембріони Вірусовмісний матеріал вводять у порожнину амніона і алантоїсу, жовтковий мішок, на хоріоналантоїсну оболонку чи в тіло 7-12 денного ембріона. Специфічні зміни в курячих ембріонах розвиваються у вигляді вогнищевого ураження, дифузного помутніння оболонок, набряку з чисельними виразками, появі пустул, везикул, помутнінням родин порожнин чи загибеллю самого курячого ембріону

Лабораторні тварини Чутливі лабораторні тварини використовувалися на перших етапах розвитку вірусології. У теперішній час вони також використовуються поряд з іншими методами культивуваня, причому перевага надається новонародженим тваринам, які більш чутливі до вірусної інфекції.

Культивування вірусів в організмі тварин

Найчастіше як піддослідні тварини служать кролики, морські свинки, білі щури, білі миші, рідше - голуби, кішки, собаки і ще рідше - мавпи. Лабораторних тварин заражають різними способами залежно від тропізму вірусу до певних тканин. Так, наприклад, для культивування нейротропних вірусів зараження виробляють переважно в мозок (віруси сказу, кліщовий енцефаліт та ін. ), культивування респіраторних вірусів здійснюється при інтраназальному інфікуванні тваринних (віруси грипу), дерматотропних (вірус віспи) - шляхом нашкірного і внутрішньошкірного зараження. Найчастіше використовуються нашкірне, внутрішньошкірне, внутрішньом'язове, внутрішньоочеревинне і внутрішньомозкове зараження.

При первинному зараженні тварини можуть не захворіти, тому через 5-7 днів зовні здорових тварин вбивають, а з їх органів готують суспензії, якими заражають наступні партії тварин. Ці послідовні зараження називаються 'пасажами'.

Індикацію, тобто виявлення факту розмноження вірусу, встановлюють на підставі розвитку типових ознак захворювання, патоморфологічних змін органів і тканин тварин або позитивної реакції гемагглютинації (РГА). РГА заснована на здатності деяких вірусів викликати аглютинацію (склеювання) еритроцитів різних видів тварин, птахів і людини за рахунок поверхневого вірусного білку - гемаглютинину. Нині використання тваринних для культивування вірусів обмежене.

Культивування вірусів в курячих ембріонах

Більшість відомих вірусів мають здатність розмножуватися в курячому ембріонові (мал. 4). Використовують ембріони у віці від 8 до 14 днів залежно від виду вірусу,

1 2 3 4